島津LC-10AT型液相色譜系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程
2012-09-21
[4418]
1．目的
規(guī)范島津LC-10AT型液相色譜系統(tǒng)的使用和維護。
2．范圍
本規(guī)程適用于島津LC-10AT型液相色譜系統(tǒng)的使用和維護。
3．職責(zé)
質(zhì)檢室儀器分析員負責(zé)島津LC-10AT型液相色譜系統(tǒng)的日常使用和維護。
4．規(guī)程
4.1系統(tǒng)組成：本系統(tǒng)由2個LC-10ATvp溶劑輸送泵（分主/A泵和副/B泵）、Rheodyne7725i手動進樣閥、SPD-10Avp紫外-可見檢測器、SCL-10AVP系統(tǒng)控制器、CLASS-VP（Ver.6.1）工作站和IBM臺式電腦等組成。
4.2準(zhǔn)備
4.2.1使用前應(yīng)根據(jù)待檢樣品的檢驗方法準(zhǔn)備所需的流動相，用合適的0.45μm濾膜過濾，超聲脫氣20min。
4.2.2根據(jù)待檢樣品的需要更換合適的色譜柱（柱進出口位置應(yīng)與流動相流向一致）和定量環(huán)。
4.2.3配制樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液（也可在平衡系統(tǒng)時配制），用合適的0.45μm濾膜過濾。
4.2.4檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常。
4.3開機
4.3.1接通電源，依次開啟不間斷電源、B泵、A泵、檢測器、系統(tǒng)控制器，待泵和檢測器自檢結(jié)束后，打開電腦顯示器、主機。
4.3.2啟動CLASS-VP工作站
4.3.2.1確認儀器、系統(tǒng)控制器啟動后，打開計算機電源，并從Windows的任務(wù)欄中選擇Start>Programs>Chromatography>CLASS-VP以打開CLASS-VP菜單窗口。（可以通過桌面上的快捷方式，迅速打開CLASS-VP主菜單）
4.3.2.2在MainMenu窗口中雙擊Instrument圖標(biāo)。
4.3.2.3輸入用戶名和口令，以登錄CLASS-VP。缺省情況下，已經(jīng)用戶名和口令分別為“system”和“2001”。
4.3.2.4當(dāng)SCL-10Avp發(fā)出蜂鳴聲后，說明已建立與計算機之間的連接，Instrument窗口打開。
4.3.2.5啟動色譜圖監(jiān)視器
4.3.2.5.1從Windows任務(wù)欄中選擇Program>Chromatography>ChromatogramMonitor以打開ChromatogramMonitor窗口。
4.3.2.5.2根據(jù)需要設(shè)置受監(jiān)視項的類型和格式。
4.3.2.6啟動脫機處理
4.3.2.6.1在MainMenu窗口中雙擊OfflineProcessing圖標(biāo)。
4.3.2.6.2雙擊為數(shù)據(jù)采集而設(shè)置的儀器名稱，以打開儀器進行脫機處理。
4.4CLASS-VP初始系統(tǒng)設(shè)置（設(shè)置方法缺省參數(shù)）
4.4.1單擊“New”按鈕，并接著單擊NewMethod即可初始化方法參數(shù)。
4.4.2從Option選項卡的Method菜單中選擇命令，并在對話框中更改每條命令的參數(shù)，以選擇常用的選項。
4.4.3選擇File>Method>SaveasDefault即可將在此處設(shè)置的選項保存成缺省參數(shù)。
4.5設(shè)置分析參數(shù)
4.5.1設(shè)置LC參數(shù)
4.5.1.1設(shè)置新的分析參數(shù)時，請從通過單擊“New”按鈕打開的列表中選擇NewMethod，則將加載缺省方法參數(shù)，且方法文件名“Untitled.met”將顯示在LCSetupAssistant窗口中，通過單擊Open按鈕即可打開現(xiàn)有的方法文件。
4.5.1.2通過在LCSetupAssistant窗口中單擊泵和檢測器的圖標(biāo)來配置LC參數(shù)。使用時鐘圖標(biāo)輸入時間程序命令。
4.5.1.3選擇File>Method>Saveas并輸入方法名稱。
4.5.2將方法下載到SCL-10Avp：完成創(chuàng)建方法之后，單擊下面的圖標(biāo)即可將該方法下載到SCL-10Avp上。下載完成時，出現(xiàn)一個消息窗口，請單擊OK。
4.5.3啟動儀器控制：激活SCL-10Avp，將液體流量調(diào)整到已下載的方法參數(shù)。當(dāng)所有組分穩(wěn)定時，出現(xiàn)“Ready”指示燈，且狀態(tài)欄變?yōu)榫G色。
4.5.4設(shè)置方法（斜率）：
4.5.4.1請在檢測器的基線穩(wěn)定之后選擇Control>PreviewRun或單擊工具欄上的“Preview”按鈕。
4.5.4.2單擊數(shù)據(jù)圖形之后，再在Integration工具欄上單擊“SLOPE”按鈕，即可從基線測量斜率的參考值。
4.5.4.3單擊SLOPE對話框中的Addtotable按鈕，即可在Method>IntegrationEvents表中記錄此設(shè)置。
4.5.5設(shè)置方法（自定義報告）：單擊工具欄上的“Report”按鈕，打開MethodCustomReport窗口；單擊“Open”按鈕，然后選擇OpenReportTemlate打開一個模板文件。
4.5.6保存已更改的方法：要當(dāng)前名稱保存方法文件，亦即覆蓋原來的名稱，請從菜單中選擇File>Method>Save命令，或單擊“Save”按鈕，然后單擊下拉菜單上的SaveMethod。4.6平衡系統(tǒng)
4.6.1系統(tǒng)的操作
4.6.1.1基線檢查
4.6.1.2單擊LCSetupAssistant窗口中“BaselineCheck”按鈕。
4.6.1.3測量噪音和漂移的起始時間和結(jié)束時間，對于Noise的Threshold值，請輸入期望的滿刻度值的大約1/100；對于Drift的Threshold值，請輸入1/10。單擊Start開始測量。測量結(jié)束后，測得的噪音值和漂移值將出現(xiàn)在Status區(qū)域里。
4.6.1.4采集數(shù)據(jù)之前要檢查基線，如果基線檢查檢查合格，即可立即開始采集。如果ExportonFail對話框已經(jīng)選中，并且在的Maximum時間內(nèi)重復(fù)進行基線檢查仍然失敗，則不會進行數(shù)據(jù)采集。
4.6.1.5啟動和關(guān)閉單擊LCSetupAssistant窗口中的Startup/ShutDown按鈕。
4.6.1.5.1設(shè)置啟動條件
4.6.1.5.1.1在Startup窗口中啟動的DateandTime，當(dāng)達到的日期和時間時即可下載的方法文件參數(shù)。
4.6.1.5.1.2如果此處未指明方法文件，則使用zui近使用的方法文件。如果需要，請在OfflineProcessing窗口中創(chuàng)建一個用于啟動的方法文件，并在此處它。
4.6.1.5.2設(shè)置關(guān)閉條件
4.6.1.5.2.1在OfflineProcessing模式下創(chuàng)建一個用于關(guān)閉的方法。通常情況下需要將泵的流速設(shè)置到低（或為零），并且需要關(guān)閉檢測器的燈管，等等。用一個新的文件名將此方法保存到磁盤上。
4.6.1.5.2.2單擊ShutDown窗口中“Open”按鈕以選擇關(guān)閉方法文件。另外，如果需要，也可選中或取消選中“SampleCoolerOFF”或“DegasserOFFAfterCoolDown”選項。
4.6.2等度洗脫方式
4.6.2.1按A泵的[pump]鍵，A、B泵將同時啟動，pump指示燈亮。用檢驗方法規(guī)定的流動相沖洗系統(tǒng)，一般zui少需6倍柱體積的流動相。
4.6.2.2檢查各管路連接處是否漏液，如漏液應(yīng)予以排除。
4.6.2.3觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動應(yīng)不超過1MPa。如超過則可初步判斷為柱前管路仍有氣泡，按4.5.6操作。
4.6.2.4觀察基線變化。如果沖洗至基線漂移<0.01mV/min，噪聲為<0.001mV時，可認為系統(tǒng)已達到平衡狀態(tài)，可以進樣。
4.6.3梯度洗脫方式
4.6.3.1以檢驗方法規(guī)定的梯度初始條件，按4.6.2項下方法平衡系統(tǒng)。
4.6.3.2在進樣前運行1~2次空白梯度。方法：按A泵的[run]鍵，prog.run指示燈亮，梯度程序運行；程序停止時，prog.run指示燈滅。
4.7進樣、采集運行
4.7.1進樣
4.7.1.1進樣前按檢測器[zero]鍵調(diào)零，按軟件中[零點校正]按鈕校正基線零點，再按一下[查看基線]按鈕使其彈起。
4.7.1.2用試樣溶液清洗注射器，并排除氣泡后抽取適量。
4.7.2采集運行
4.7.2.1從菜單欄中選擇Control>ShowTray?；蛘?，單擊LCSetupAssistant窗口中的“SingleRun”按鈕或工具欄上的SingleRun按鈕。所需的項并單擊Start按鈕。
4.7.2.2記錄自動啟動和關(guān)閉：單擊LCSetupAssistant窗口中的Start/ShutDown按鈕。在Start/ShutDown對話框中單擊需要記錄的Startup、ShutDown和Startup/ShutDown中的任一按鈕并確認或更改設(shè)置。單擊Submit按鈕進入待機對話框，該對話框停留在屏幕上等候執(zhí)行設(shè)置。
4.7.2.3終止采集
4.7.2.3.1延長運行時間：選擇Control>ExtendRun并輸入添加到運行結(jié)束的時間值。要縮短采集時間，請一個負值。（對當(dāng)前采集有效）
4.7.2.3.2緊急停機
4.7.2.3.2.1采集過程中，單擊工具欄上的“StopRun”按鈕。接著就會出現(xiàn)一條消息，詢問您是否“Abortthecurrentrun”,如果單擊Yes，當(dāng)前的數(shù)據(jù)采集就會終止。
4.7.2.3.2.2如果在隨后出現(xiàn)的消息上單擊Yes,剩余的采集就不會再運行，序列就會終止。如果單擊No,剩余的采集就會開始運行。
4.8更換流動相并排氣泡
4.8.1將A/B管路的吸濾器放入裝有準(zhǔn)備好的流動相的儲液瓶中；
4.8.2逆時針轉(zhuǎn)動A/B泵的排液閥180°，打開排液閥；
4.8.3按A/B泵的[purge]鍵，pump指示燈亮，泵大約以9.9ml/min的流速沖洗，3min（可設(shè)定）后自動停止；
4.8.4將排液閥順時針旋轉(zhuǎn)到底，關(guān)閉排液閥。
4.8.5如管路中仍有氣泡，則重復(fù)以上操作直至氣泡排盡。
4.8.6如按以上方法不能排盡氣泡，從柱入口處拆下連接管，放入廢液瓶中，設(shè)流速為5ml/min，按[pump]鍵，沖洗3min后再按[pump]鍵停泵，重新接上柱并將流速重設(shè)為規(guī)定值。
4.9清洗系統(tǒng)和關(guān)機
4.9.1數(shù)據(jù)采集完畢后，關(guān)閉檢測器，繼續(xù)以工作流動相沖洗10min后，換水沖洗。
4.9.2清洗進樣閥
4.9.2.1用啟動注射器吸10ml超純水；
4.9.2.2將注射針導(dǎo)入口沖洗頭（Rheodyne部件號7125-054）連接到注射器出口上（不要針），并將它們一起接到進樣口上；
4.9.2.3使進樣閥保持在Inject位置，慢慢將水推入，水將通過注射針導(dǎo)入口、引導(dǎo)管、注射針導(dǎo)入管和注射針密封圈，由樣品溢出管排出。
4.9.3清洗柱
4.9.3.1C18柱先用超純水以1ml/min沖洗40min以上，再用甲醇或乙腈沖洗20min。
4.9.3.2ProteinPAK60柱先用超純水沖洗90min以上，再用甲醇或乙腈沖洗40min。
4.9.4用水沖洗柱后，分別用20ml超純水沖洗柱塞桿外部和法蘭盤上小孔。
4.9.5清洗完成后，先將流速降到0，再依次關(guān)閉泵、脫氣機、UPS，斷開電源。
4.9.6填寫使用記錄。
規(guī)范島津LC-10AT型液相色譜系統(tǒng)的使用和維護。
2．范圍
本規(guī)程適用于島津LC-10AT型液相色譜系統(tǒng)的使用和維護。
3．職責(zé)
質(zhì)檢室儀器分析員負責(zé)島津LC-10AT型液相色譜系統(tǒng)的日常使用和維護。
4．規(guī)程
4.1系統(tǒng)組成：本系統(tǒng)由2個LC-10ATvp溶劑輸送泵（分主/A泵和副/B泵）、Rheodyne7725i手動進樣閥、SPD-10Avp紫外-可見檢測器、SCL-10AVP系統(tǒng)控制器、CLASS-VP（Ver.6.1）工作站和IBM臺式電腦等組成。
4.2準(zhǔn)備
4.2.1使用前應(yīng)根據(jù)待檢樣品的檢驗方法準(zhǔn)備所需的流動相，用合適的0.45μm濾膜過濾，超聲脫氣20min。
4.2.2根據(jù)待檢樣品的需要更換合適的色譜柱（柱進出口位置應(yīng)與流動相流向一致）和定量環(huán)。
4.2.3配制樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液（也可在平衡系統(tǒng)時配制），用合適的0.45μm濾膜過濾。
4.2.4檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常。
4.3開機
4.3.1接通電源，依次開啟不間斷電源、B泵、A泵、檢測器、系統(tǒng)控制器，待泵和檢測器自檢結(jié)束后，打開電腦顯示器、主機。
4.3.2啟動CLASS-VP工作站
4.3.2.1確認儀器、系統(tǒng)控制器啟動后，打開計算機電源，并從Windows的任務(wù)欄中選擇Start>Programs>Chromatography>CLASS-VP以打開CLASS-VP菜單窗口。（可以通過桌面上的快捷方式，迅速打開CLASS-VP主菜單）
4.3.2.2在MainMenu窗口中雙擊Instrument圖標(biāo)。
4.3.2.3輸入用戶名和口令，以登錄CLASS-VP。缺省情況下，已經(jīng)用戶名和口令分別為“system”和“2001”。
4.3.2.4當(dāng)SCL-10Avp發(fā)出蜂鳴聲后，說明已建立與計算機之間的連接，Instrument窗口打開。
4.3.2.5啟動色譜圖監(jiān)視器
4.3.2.5.1從Windows任務(wù)欄中選擇Program>Chromatography>ChromatogramMonitor以打開ChromatogramMonitor窗口。
4.3.2.5.2根據(jù)需要設(shè)置受監(jiān)視項的類型和格式。
4.3.2.6啟動脫機處理
4.3.2.6.1在MainMenu窗口中雙擊OfflineProcessing圖標(biāo)。
4.3.2.6.2雙擊為數(shù)據(jù)采集而設(shè)置的儀器名稱，以打開儀器進行脫機處理。
4.4CLASS-VP初始系統(tǒng)設(shè)置（設(shè)置方法缺省參數(shù)）
4.4.1單擊“New”按鈕，并接著單擊NewMethod即可初始化方法參數(shù)。
4.4.2從Option選項卡的Method菜單中選擇命令，并在對話框中更改每條命令的參數(shù)，以選擇常用的選項。
4.4.3選擇File>Method>SaveasDefault即可將在此處設(shè)置的選項保存成缺省參數(shù)。
4.5設(shè)置分析參數(shù)
4.5.1設(shè)置LC參數(shù)
4.5.1.1設(shè)置新的分析參數(shù)時，請從通過單擊“New”按鈕打開的列表中選擇NewMethod，則將加載缺省方法參數(shù)，且方法文件名“Untitled.met”將顯示在LCSetupAssistant窗口中，通過單擊Open按鈕即可打開現(xiàn)有的方法文件。
4.5.1.2通過在LCSetupAssistant窗口中單擊泵和檢測器的圖標(biāo)來配置LC參數(shù)。使用時鐘圖標(biāo)輸入時間程序命令。
4.5.1.3選擇File>Method>Saveas并輸入方法名稱。
4.5.2將方法下載到SCL-10Avp：完成創(chuàng)建方法之后，單擊下面的圖標(biāo)即可將該方法下載到SCL-10Avp上。下載完成時，出現(xiàn)一個消息窗口，請單擊OK。
4.5.3啟動儀器控制：激活SCL-10Avp，將液體流量調(diào)整到已下載的方法參數(shù)。當(dāng)所有組分穩(wěn)定時，出現(xiàn)“Ready”指示燈，且狀態(tài)欄變?yōu)榫G色。
4.5.4設(shè)置方法（斜率）：
4.5.4.1請在檢測器的基線穩(wěn)定之后選擇Control>PreviewRun或單擊工具欄上的“Preview”按鈕。
4.5.4.2單擊數(shù)據(jù)圖形之后，再在Integration工具欄上單擊“SLOPE”按鈕，即可從基線測量斜率的參考值。
4.5.4.3單擊SLOPE對話框中的Addtotable按鈕，即可在Method>IntegrationEvents表中記錄此設(shè)置。
4.5.5設(shè)置方法（自定義報告）：單擊工具欄上的“Report”按鈕，打開MethodCustomReport窗口；單擊“Open”按鈕，然后選擇OpenReportTemlate打開一個模板文件。
4.5.6保存已更改的方法：要當(dāng)前名稱保存方法文件，亦即覆蓋原來的名稱，請從菜單中選擇File>Method>Save命令，或單擊“Save”按鈕，然后單擊下拉菜單上的SaveMethod。4.6平衡系統(tǒng)
4.6.1系統(tǒng)的操作
4.6.1.1基線檢查
4.6.1.2單擊LCSetupAssistant窗口中“BaselineCheck”按鈕。
4.6.1.3測量噪音和漂移的起始時間和結(jié)束時間，對于Noise的Threshold值，請輸入期望的滿刻度值的大約1/100；對于Drift的Threshold值，請輸入1/10。單擊Start開始測量。測量結(jié)束后，測得的噪音值和漂移值將出現(xiàn)在Status區(qū)域里。
4.6.1.4采集數(shù)據(jù)之前要檢查基線，如果基線檢查檢查合格，即可立即開始采集。如果ExportonFail對話框已經(jīng)選中，并且在的Maximum時間內(nèi)重復(fù)進行基線檢查仍然失敗，則不會進行數(shù)據(jù)采集。
4.6.1.5啟動和關(guān)閉單擊LCSetupAssistant窗口中的Startup/ShutDown按鈕。
4.6.1.5.1設(shè)置啟動條件
4.6.1.5.1.1在Startup窗口中啟動的DateandTime，當(dāng)達到的日期和時間時即可下載的方法文件參數(shù)。
4.6.1.5.1.2如果此處未指明方法文件，則使用zui近使用的方法文件。如果需要，請在OfflineProcessing窗口中創(chuàng)建一個用于啟動的方法文件，并在此處它。
4.6.1.5.2設(shè)置關(guān)閉條件
4.6.1.5.2.1在OfflineProcessing模式下創(chuàng)建一個用于關(guān)閉的方法。通常情況下需要將泵的流速設(shè)置到低（或為零），并且需要關(guān)閉檢測器的燈管，等等。用一個新的文件名將此方法保存到磁盤上。
4.6.1.5.2.2單擊ShutDown窗口中“Open”按鈕以選擇關(guān)閉方法文件。另外，如果需要，也可選中或取消選中“SampleCoolerOFF”或“DegasserOFFAfterCoolDown”選項。
4.6.2等度洗脫方式
4.6.2.1按A泵的[pump]鍵，A、B泵將同時啟動，pump指示燈亮。用檢驗方法規(guī)定的流動相沖洗系統(tǒng)，一般zui少需6倍柱體積的流動相。
4.6.2.2檢查各管路連接處是否漏液，如漏液應(yīng)予以排除。
4.6.2.3觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動應(yīng)不超過1MPa。如超過則可初步判斷為柱前管路仍有氣泡，按4.5.6操作。
4.6.2.4觀察基線變化。如果沖洗至基線漂移<0.01mV/min，噪聲為<0.001mV時，可認為系統(tǒng)已達到平衡狀態(tài)，可以進樣。
4.6.3梯度洗脫方式
4.6.3.1以檢驗方法規(guī)定的梯度初始條件，按4.6.2項下方法平衡系統(tǒng)。
4.6.3.2在進樣前運行1~2次空白梯度。方法：按A泵的[run]鍵，prog.run指示燈亮，梯度程序運行；程序停止時，prog.run指示燈滅。
4.7進樣、采集運行
4.7.1進樣
4.7.1.1進樣前按檢測器[zero]鍵調(diào)零，按軟件中[零點校正]按鈕校正基線零點，再按一下[查看基線]按鈕使其彈起。
4.7.1.2用試樣溶液清洗注射器，并排除氣泡后抽取適量。
4.7.2采集運行
4.7.2.1從菜單欄中選擇Control>ShowTray?；蛘?，單擊LCSetupAssistant窗口中的“SingleRun”按鈕或工具欄上的SingleRun按鈕。所需的項并單擊Start按鈕。
4.7.2.2記錄自動啟動和關(guān)閉：單擊LCSetupAssistant窗口中的Start/ShutDown按鈕。在Start/ShutDown對話框中單擊需要記錄的Startup、ShutDown和Startup/ShutDown中的任一按鈕并確認或更改設(shè)置。單擊Submit按鈕進入待機對話框，該對話框停留在屏幕上等候執(zhí)行設(shè)置。
4.7.2.3終止采集
4.7.2.3.1延長運行時間：選擇Control>ExtendRun并輸入添加到運行結(jié)束的時間值。要縮短采集時間，請一個負值。（對當(dāng)前采集有效）
4.7.2.3.2緊急停機
4.7.2.3.2.1采集過程中，單擊工具欄上的“StopRun”按鈕。接著就會出現(xiàn)一條消息，詢問您是否“Abortthecurrentrun”,如果單擊Yes，當(dāng)前的數(shù)據(jù)采集就會終止。
4.7.2.3.2.2如果在隨后出現(xiàn)的消息上單擊Yes,剩余的采集就不會再運行，序列就會終止。如果單擊No,剩余的采集就會開始運行。
4.8更換流動相并排氣泡
4.8.1將A/B管路的吸濾器放入裝有準(zhǔn)備好的流動相的儲液瓶中；
4.8.2逆時針轉(zhuǎn)動A/B泵的排液閥180°，打開排液閥；
4.8.3按A/B泵的[purge]鍵，pump指示燈亮，泵大約以9.9ml/min的流速沖洗，3min（可設(shè)定）后自動停止；
4.8.4將排液閥順時針旋轉(zhuǎn)到底，關(guān)閉排液閥。
4.8.5如管路中仍有氣泡，則重復(fù)以上操作直至氣泡排盡。
4.8.6如按以上方法不能排盡氣泡，從柱入口處拆下連接管，放入廢液瓶中，設(shè)流速為5ml/min，按[pump]鍵，沖洗3min后再按[pump]鍵停泵，重新接上柱并將流速重設(shè)為規(guī)定值。
4.9清洗系統(tǒng)和關(guān)機
4.9.1數(shù)據(jù)采集完畢后，關(guān)閉檢測器，繼續(xù)以工作流動相沖洗10min后，換水沖洗。
4.9.2清洗進樣閥
4.9.2.1用啟動注射器吸10ml超純水；
4.9.2.2將注射針導(dǎo)入口沖洗頭（Rheodyne部件號7125-054）連接到注射器出口上（不要針），并將它們一起接到進樣口上；
4.9.2.3使進樣閥保持在Inject位置，慢慢將水推入，水將通過注射針導(dǎo)入口、引導(dǎo)管、注射針導(dǎo)入管和注射針密封圈，由樣品溢出管排出。
4.9.3清洗柱
4.9.3.1C18柱先用超純水以1ml/min沖洗40min以上，再用甲醇或乙腈沖洗20min。
4.9.3.2ProteinPAK60柱先用超純水沖洗90min以上，再用甲醇或乙腈沖洗40min。
4.9.4用水沖洗柱后，分別用20ml超純水沖洗柱塞桿外部和法蘭盤上小孔。
4.9.5清洗完成后，先將流速降到0，再依次關(guān)閉泵、脫氣機、UPS，斷開電源。
4.9.6填寫使用記錄。
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